病理组织切片全景扫描技术（Whole Slide Imaging, WSI）是近年来病理学领域的重要创新，尤其是在数字化病理诊断和医学研究中发挥着越来越重要的作用。

1. 设备准备与安装

病理组织切片全景扫描通常需要专业的全景扫描仪来进行操作。常见的设备包括奥林巴斯、3DHistech、Leica等品牌的全景扫描仪。使用前，首先需要进行以下准备工作：

（1）硬件安装与调试

设备检查：确保扫描仪、电源、电脑等硬件设备连接正常，设备的各项功能（如载物台、扫描头、聚焦系统）运行良好。

清洁设备：在进行扫描之前，应清洁扫描仪的光学部件、载物台以及镜头，避免尘土或污染影响图像质量。

安装扫描软件：大多数全景扫描仪配有专用的软件，用于控制扫描过程、调整设置以及图像后处理。确保软件安装并成功运行。

（2）载物台准备

扫描仪的载物台需要预先调整好，确保其稳定并能够准确地移动切片。根据不同扫描仪的要求，载物台的承载能力、样本定位精度等需要根据操作手册进行适当的设置。

2. 样本准备

病理组织切片通常是通过切片机从组织块中切割而来的，厚度一般为3-5微米。样本准备的正确性直接关系到扫描结果的清晰度和精确性。

（1）切片与玻片装载

切片厚度：确保切片的厚度均匀，过厚或过薄的切片会影响扫描效果。切片的厚度通常为3至5微米。

固定与染色：切片在进行扫描前通常需要进行固定（如福尔马林固定）、脱水和染色（如HE染色或其他特定染色方法），以确保样本的稳定性和结构可见性。

载玻片处理：将切片放置在干净、无尘的载玻片上，确保切片平整、无气泡或其他杂质。

（2）载玻片加载

根据扫描仪的型号和要求，将载玻片轻轻放置在扫描仪的载物台上，确保切片处于正确的位置。现代全景扫描仪大多配备自动进片装置，可以自动加载切片。

3. 扫描设置

全景扫描仪通常配有用户友好的操作界面，允许操作人员根据实验需求调整扫描参数。

（1）图像分辨率

选择适当的图像分辨率是确保扫描质量的关键。常见的分辨率设置包括：

低分辨率：用于大范围扫描，适合快速查看组织切片的整体情况，通常分辨率在1-5μm之间。

高分辨率：用于细节观察，适合对病变区域进行精确分析，分辨率通常在0.25μm到1μm之间。高分辨率扫描可以提供更清晰的组织细节，但扫描时间较长。

（2）扫描区域

大多数全景扫描仪支持自动化扫描，可以根据需要选择扫描切片的特定区域或整个切片。如果是常规检查，可以选择整个切片进行扫描；对于局部病变分析，用户可以手动指定区域。

（3）对焦设置

扫描前，确保扫描仪自动对焦系统正确工作。自动对焦功能会自动调节扫描头的位置，以确保图像的清晰度。如果扫描仪不具备自动对焦功能，用户需要手动调整扫描头的焦距，确保组织表面与扫描镜头对焦良好。

（4）光源设置

选择适当的光源强度和照明方式（例如LED灯、荧光灯等），确保切片的色彩和对比度清晰，避免过度曝光或过暗。

4. 开始扫描

设置完成后，可以开始扫描过程。全景扫描仪的工作流程一般分为几个步骤：

自动扫描：全景扫描仪通过自动化系统依次扫描切片的每个区域，从而形成完整的数字图像。根据所选分辨率和扫描区域的大小，扫描过程可能需要几分钟到数小时不等。

图像拼接：如果切片较大，扫描仪会将多个局部图像拼接成一个完整的全景图像。高分辨率扫描时，拼接技术对于确保图像无缝对接至关重要。

5. 图像处理与分析

扫描完成后，扫描仪将输出一个完整的数字切片图像，用户可以通过配套的图像处理和分析软件进行后续操作。

（1）图像调整

在图像处理软件中，用户可以进行一系列调整操作，例如：

亮度/对比度调整：优化图像的亮度和对比度，使组织结构更加清晰。

色彩平衡：调整图像的色彩，确保染色结果准确呈现。

放大与缩小：放大特定区域，查看细节，特别是病变区域。

（2）图像标注与测量

在扫描图像中，病理学家可以通过软件标注病变区域或测量组织结构的尺寸。现代的数字病理系统通常配备自动化分析功能，可以自动标记病变区域、计算细胞计数、测量肿瘤大小等。

（3）报告生成

通过分析软件，病理学家可以生成数字报告，报告中包括图像、诊断意见、测量数据等内容。数字报告便于存档、共享和远程协作，极大地提高了病理诊断效率。

6. 保存与管理图像

扫描完成后的图像可以保存为不同格式（如TIFF、JPEG等），并存储在医院或实验室的数据库中。图像可以方便地进行管理、检索和共享，病理学家可以随时访问以前的病例进行对比和分析。许多医院和研究机构还使用图像管理软件，集成病例信息和诊断结果，实现全面的数字化病理管理。

7. 常见问题与注意事项

在使用全景扫描仪进行病理组织切片扫描时，可能会遇到一些问题：

图像模糊：检查是否对焦不准确或切片位置偏移。

扫描速度慢：高分辨率设置可能导致扫描时间过长，可根据实际需求调整分辨率。

图像拼接问题：若拼接不完整，可能是因为扫描过程中出现了误差，确保扫描头在扫描过程中保持稳定。

8. 总结

病理组织切片全景扫描技术的使用方法非常便捷，具有高效率和高精度的优点。通过正确的设备设置和图像处理，用户可以获得高清的数字切片图像，帮助病理学家更好地诊断疾病。